3. 4　不同提取液中叶绿素的稳定性

用不同提取溶剂提取珊瑚树叶片叶绿素, 在25℃生化培养箱中暗中放置0、3、6 天后测定提取液中叶绿素含量, 结果见表2。叶绿素提取液放置6 天后, 叶绿素a 下降了5.8% —11.9% , 叶绿素b下降了2.7% —7.4% , 叶绿素总量下降了4.9% —10.5%。这些都说明, 在这些提取液中, 叶绿素b比叶绿素a 稳定。叶绿素提取液中叶绿素a、叶绿素b 的含量、稳定性与提取材料、提取液性质和提取液含水量有关。为了提高叶绿素提取液的稳定性, 可通过降低提取液中的含水量来实现。但若所用的材料是干粉, 提取液中最好含有适量的水分, 使叶绿素分子中亲水的基因易与蛋白质分离,利于叶绿素从类囊体膜中游离出来。有些学者曾采用比传统丙酮法含水量更低的丙酮提取液提取鲜叶叶绿素, 效果较好。本试验结果表明, 叶绿素在不同提取液中稳定性的大小依次为: 95% 丙酮2乙醇> 95%乙醇> 80%丙酮。

3. 5　精密度实验

95% 丙酮2乙醇提取效果好, 提取速度快, 具有较高的精密度(表3)。

4　结论

分光光度法测定植物叶片叶绿素含量, 由于所用提取溶剂不同, 测定结果差异显著。一种好的提取溶剂应该提取速度快, 叶绿素得率高, 稳定性好, 测定结果精密度高, 吸收光谱与传统丙酮法一致, 能用A rnon 公式计算叶绿素含量。本试验结果表明, 95% 丙酮2乙醇法具有上述特点, 是一种较好的叶绿素提取溶剂, 而传统的80% 丙酮法和95% 乙醇法提取叶绿素速度慢, 提取不完全, 应慎用。叶片经匀浆后再用丙酮2乙醇提取, 叶绿素得率与叶片浸泡法相似, 但大大提高了提取速度, 这对于快速测定大量样品叶绿素含量具有实际意义。