青菜叶中叶绿素含量的测定原理

将青菜叶中叶绿素萃取到丙酮中，然后将溶于丙酮中的叶绿素转移到乙醚中，在指定的波长下，测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度，然后根据公式计算青菜叶中叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。

青菜叶中叶绿素含量的测定试剂

碳酸钙、无水硫酸钠、85%丙酮、乙醚，如果需要对照，则还可以增加SPAD502叶绿素仪（叶绿素测量仪是手持式的，将叶片直接夹于叶片上就可以测得所需的数值，一般用spad值表示）

青菜叶中叶绿素含量的测定步骤

1.称取60g新鲜青菜叶置于组织捣碎机中，然后加入0.1g碳酸钙和85ml丙酮，在告诉组织捣碎机中，在转速20000r/min下捣碎2min，破碎青菜叶组织。

2.抽滤所得的匀浆，用少量85%丙酮多次洗涤残渣，直到残渣不带绿色位置，将溶液合并后用丙酮定容至1L。

3.吸取25ml叶绿素-丙酮溶液，加入到含有25ml乙醚的分液漏斗中，然后加入50ml水，观察到所有叶绿素都转入上层乙醚相时，放出下层水相。

4.在另一只分液漏斗中加入50ml水，插入一只末端拉成小孔的玻璃管，将叶绿素-乙醚溶液注入玻璃管，溶液通过玻璃管末端小孔进入水相后再上升聚集在水相表面，放出下层水相，重复上述操作步骤五次，让溶于叶绿素-乙醚溶液中的丙酮转移到水相中，将乙醚层转移至容量瓶中。

5.将以上放出的下层水相合并，加入25ml乙醚，同上操作。将所得乙醚层也转移至容量瓶中。

6.用乙醚将叶绿素-乙醚溶液定容到100ml。

7.用少量无水硫酸钠吸收叶绿素-乙醇溶液中的水分。

8.在波长660.0nm和642.0nm下，分别测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度。

青菜叶中叶绿素含量的测定计算

1.总叶绿素、叶绿素a和叶绿素b(mg/l)的计算公式如下：

式中A660.0和A642.5分别代表波长为660.0nm和642.5nm测定叶绿素-乙醚溶液所得的吸光度值。

2.计算样品中叶绿素的含量，表达为100g青菜叶中含有的叶绿素的mg数。